ПЦР диагностика при хламидиозе


ПРОЧИЕ 198 просмотров

Хламидиоз – это инфекционное венерическое заболевание, которое передается через половой контакт с зараженным партнером. Паразитирующие микроорганизмы активно размножаются и спустя две-три недели проявляются в первых неприятных симптомах. Зуд в области половых органов, выделения с неприятным запахом и боли внизу живота – сигналы, на который человек должен отреагировать без промедления. В качестве диагностики хламидиоза назначаются специальные лабораторные исследования взятого у зараженного человека биоматериала. Проходить обследования следует двум партнерам для назначения комплексного и эффективного лечения. Анализ ПЦР на хламидии на сегодняшний день является одним из самых точных и популярных для диагностики инфекции, вызванной заражением патогенных микроорганизмов.

Анализ на хламидии

Внешний первичный осмотр у врача не позволяет поставить точные диагнозы. Пациент опрашивается, а на основе его жалоб выдвигаются предположения о возможном заболевании. Уточнение спорного диагноза возможно только на основе результатов лабораторных исследований и различных анализов. ПЦР – это полимеразная цепная реакция. Популярный и эффективный метод заключается в исследовании самых малых частиц ДНК во взятом у пациента образце. Искусственное увеличение этих частиц с помощью ферментов позволяет увидеть возбудителя инфекции – хламидии. Точность методики ПЦР значительно выше, чем у схожих анализов. Определить хламидиоз на ранних стадиях можно только благодаря проведенному ПЦР. Другие же методы диагностики нуждаются в подтверждении.

Результаты анализов зависят от того, как подготовится пациент, сколько прошло времени с момента заражения и от индивидуальных особенностей организма инфицированного человека. Мазок на хламидии методом ПЦР назначается только врачом, и только опытный специалист занимается расшифровкой полученных результатов. Определение хламидии с помощью ПЦР не займет много времени, и позволит в кратчайшие сроки начать эффективное лечение венерической болезни.


Жизненный цикл хламидий

Подготовка к анализу

ПЦР на хламидиоз происходит только после тщательной подготовки пациента. Соблюдение рекомендаций специалиста – гарантия точных результатов. Правила подготовки к сдаче биоматериала:

  1. За тридцать дней до сдачи анализов, пациенту следует отказаться от приема любых медикаментов, в том числе антибиотиков и противогрибковых препаратов. В исключительных случаях, врачом назначаются средства, не влияющие на будущие результаты ПЦР (пациент страдает на хронические заболевания или возникала срочная необходимость для диагностики хламидиоза).
  2. Собрать подходящий материал для дальнейших лабораторных исследований можно только спустя три, четыре часа после последнего мочеиспускания пациента.
  3. Любые половые контакты прекращаются за неделю до сдачи анализов (ПЦР на хламидии). В противном случае, результаты будут неточными.
  4. Для женщин назначается забор биоматериала только на четвертый день после окончания менструации.
  5. За неделю до анализа, женщине следует отказаться от спринцевания или схожих очистительных процедур, которые может назначить гинеколог.

Подготовка к лабораторным исследованиям образца, взятого у пациента, является обязательным условием правильной диагностики инфекции. Пренебрежение рекомендация и назначений специалиста могут привести к осложнениям вследствие некорректного лечения хламидиоза.

Способ забора крови

Анализ на хламидии методом ПЦР не требует забора большого количества биоматериала пациента. Выведение частиц ДНК с помощью ферментации образца проходит при минимальном объеме биоматериала (не влияет ни результаты исследования). Для анализа могут сдаваться кровь и образцы из слизистой половых органов. Для мужчин назначается соскоб с уретры (концентрация паразитарных микроорганизмов в эякуляте мужчин больше, чем на слизистой женских половых органов). Женщины сдают образцы крови, во избежание гормональных перепадов, которые влияют на биоматериал из влагалища. Мазок также не сдают беременные с подозрением на развитие хламидиоза.

Назначение обследования

Диагностика хламидиоза касается каждого взрослого пациента, у которого появились неприятные симптомы. Женщинам, планирующим беременность, так же назначаются различные анализы для определения патогенных микроорганизмов и паразитов (перед зачатием). Если в паре болеет один партнер, второму следует пройти стандартную диагностику на наличие хламидий. Заражение от сексуального партнера и рецидивы заболевания (заражение через партнера, который не прошел лечение) проявляются в осложненных формах. Врач, ознакомленный с анамнезом пациента, определяет порядок сдачи тех или иных анализов.

Эффективный метод диагностики для выявления инфекции

Определение возбудителей инфекционных или паразитарных заболеваний по крови считается наиболее точным и безопасным для пациентов разного возраста, пола и положения. Метод ПЦР помогает подтвердить заболевание в кратчайшие сроки, в случаях развития:

  • ВИЧ (вирус иммунодефицита человека);
  • гепатиты класса В и С;
  • паразитарных заболеваний (уреаплазмоза и трихомониаза);
  • таких грибковых заболеваний, как кандидоз;
  • мононуклеоза;
  • обнаружить вирус папилломы;
  • туберкулеза.

Метод полимеразной реакции используется в современной медицине, как один из самых эффективных способов диагностики хламидиоза.

Проведение анализа

Анализ, основанный на цепной реакции мелких частиц ДНК под воздействием ферментов, происходит в несколько этапов. Пациент соблюдает все рекомендации врача и тщательно подготавливается к сдаче образца. Исследование ПЦР начинается с забора крови или биоматериала с половых органов пациента с подозрением на хламидиоз. Если для дальнейших лабораторных исследований берутся соскобы, то мужчины проходят процедуру в кабинете уролога, а женщины обращаются к гинекологу.

У представителя сильного пола процесс занимает больше времени, так как для взятия образца необходимо воспользоваться специальными инструментами: ложечкой и зондом. Приспособления для забора биоматериала вводятся непосредственно в уретру мужчины, а затем аккуратно извлекаются образцы для проведения анализа. Зонд помещается в подготовленную очищенную пробирку (заполнена транспортной средой). Схожим образом собирается биоматериал из влагалища женщины. В особых случаях, когда забор образца из уретры невозможен (по разным причинам), у мужчин берутся слюна, моча после массажа простаты или эякулят. После взятия соскоба, полученные образцы отправляются в лабораторию для дальнейших исследований.

Расшифровка результатов

В быстрой и точной диагностике важны не столько способы забора биоматериала, как результаты, которые следует правильно расшифровать. Для человека без медицинского образования, понять заключение лабораторных исследований невозможно. Диагноз ставится на основе:

  • опроса пациента (составленный на первичном осмотре анамнез);
  • двух и более результатов лабораторных исследований;
  • сопутствующих заболеваний, которые были обнаружены в ходе комплексного обследования организма.

Отрицательные результаты ПЦР свидетельствуют об отсутствии патогенных микроорганизмов в исследуемом образце. Положительный результат говорит о наличии возбудителя паразитарного заболевания в теле человека. Такой метод диагностики позволяет увидеть состав микрофлоры половых органов.

Почему мазок ПЦР на обнаружение хламидии считается наиболее точным? Сдача биоматериала для дальнейшего исследования таким методов позволяет получить быстрые результаты, что немаловажно при запущенном заболевании. Разные методики забора образца помогают избежать противопоказаний для беременных, женщин с гормональными сбоями и мужчин, которым не удается сдать соскоб. ПЦР помогает определить множество возбудителей опасных заболеваний. Безопасный метод используется на любых стадиях болезни, которая передается через половой контакт.

Источник: IvsParazit.ru

34 338

Как известно, всякая болезнь имеет свои, присущие только ей, признаки. Но это не имеет никакого отношения к хламидиозу.
Хламидиоз – это болезнь, которая не имеет чётких симптомов, присущих только ей, а иногда и вовсе протекает бессимптомно. И даже если какие-то симптомы проявляются, то чаще всего они схожи с признаками других ЗППП.
Поэтому для постановки диагноза решающими являются лабораторные методы исследования. В отличие от многих других заболеваний диагноз хламидиоз – чисто лабораторный.

Кто, прежде всего, должен обследоваться на хламидиоз?

  • Мужчины и женщины, имеющие много половых партнеров, особенно случайных.
  • Лица, у половых партнёров которых обнаружен хламидиоз, даже при отсутствии жалоб и симптомов. Ведь осложнения хламидиоза могут развиваться даже при его бессимптомном течении. Риск заражения партнера составляет около 90%.
  • Женщины, страдающие бесплодием более 2 лет, даже в том случае, если половой партнёр обследован и здоров.
  • Женщины с эрозиями шейки матки, цервицитами, воспалением яичников (особенно при планировании беременности). Причем влагалищный мазок при этом может быть нормальный.
  • Женщины с нарушением протекания беременности: самопроизвольные выкидыши, преждевременные роды, многоводие, повышение температуры неясного происхождения во время настоящей беременности.

Что исследуют?
Для обнаружения хламидий необходимо произвести забор материала. Это может быть соскоб, содержащий клетки больного органа — влагалища, шейки матки, секрет простаты, соскоб из уретры, конъюнктивы глаза. Таким материалом также может быть кровь, моча и сперма у мужчин.

Какие анализы назначают при хламидиозе и насколько они могут быть полезны?
Сначала мы остановимся на возможных методах обследования, а затем сделаем вывод, какие из них наиболее предпочтительны.

1. Цитологический (микроскопический) анализ.
Учитывая то, что хламидия – внутриклеточный паразит, в обычном мазке выделений её обнаружить не удаётся. Поэтому для микроскопии берут не мазок, а соскоб, который содержит клетки больного органа (влагалища, шейки матки, секрет простаты, соскоб из уретры, конъюнктивы глаза) и окрашивают его специальным красителем. Накапливая определённые красители, хламидия становится видна под микроскопом.
Цитологический метод эффективен только при острых формах заболевания
. Он проводится только при отсутствии возможности использовать другие методы.
При урогенитальном хламидиозе точность этого анализа равна примерно 10-12%

2. Иммуноцитологический анализ — Реакция прямой иммунофлюоресценции (РИФ или ПИФ).
Этот метод предусматривает прямое выявление антигенов хламидий. Для этого материал, полученный при соскобе, обрабатывают специальными антителами, которые непосредственно обработаны флуоресцирующим веществом. Эти антитела связываются со специфическими антигенами хламидий. Затем при люминесцентной микроскопии хламидийные включения в клетках определяют по зелёному или желто-зеленому свечению.
Иммуноцитологический метод используется как при острой, так и при хронической фазе заболевания.
Существенным недостатком РИФ является большое количество ложноотрицательных и ложноположительных результатов. Ложноотрицательные результаты чаще всего связаны с нарушением правил забора биологического материала. Ложноположительные результаты могут быть следствием сочетанных инфекций урогенитального тракта, когда вместе с хламидией присутствует другая микробная флора. Кроме всего прочего, РИФ носит очень субъективный характер, т.к. зависит от опыта и личной оценки лаборанта. Поэтому РИФ дает очень высокий процент ложноположительных результатов и не может считаться достоверным. Недостатком РИФ также является то, что с её помощью нельзя оценить результаты лечения.
При урогенитальном хламидиозе точность метода составляет около 50%.

3. Иммуноферментный анализ (ИФА).
ИФА является методом непрямого выявления бактерий, т.е. возбудитель не обнаруживается непосредственно, а определяются специфические антитела (IgG, IgA, IgM) к нему. В основе метода лежит способность иммунной системы вырабатывать антитела (иммуноглобулины, Ig) в ответ на внедрение чужеродных агентов.
Преимущества ИФА заключаются в том, что он позволяет не только выявить возбудителя заболевания, но также определить на какой стадии оно находится (острой или хронической) и оценить эффективность проведенного лечения
. Преимуществом также является автоматизация метода и быстрота его проведения.

Как оценивают результаты?
При инфицировании хламидиями специфические антитела появляются на 5-20-й день заболевания. При этом появление каждого класса антител происходит на определённой стадии заболевания.

  • При первичном инфицировании сначала появляются IgМ, затем – IgA, и в последнюю очередь – IgG.
  • Самыми первыми после первичного инфицирования (через 5 дней) появляются IgM, которые защищают организм от возможного распространения инфекции. Они являются маркерами острой стадии заболевания. К 10-му дню количество IgM в крови достигает пика. Затем их уровень начинает снижаться, и появляются IgA. В течение небольшого периода времени могут обнаруживаться параллельно IgM и IgA антитела. Этот период свидетельствует о разгаре инфекционного процесса.
  • IgA можно обнаружить через 10 дней от момента появления первичных симптомов заболевания. Они защищают слизистые оболочки от проникновения бактерий глубоко в ткани. Высокий уровень IgA в выделениях слизистых оболочек говорит о хорошо функционирующем местном иммунитете.
  • Затем, через 15 — 20 дней после внедрения в организм Chlamydia trachomatis в крови появляются IgG, а уровень IgA снижается.
  • Острый первичный процесс характеризуется высоким уровнем (титром) IgM в сочетании с низким титром IgG.
  • При повторном заражении отмечается быстрое нарастание титра IgG и IgА и практически полное отсутствие IgM.
  • При хроническом течении выявляются специфические IgG и А, концентрации которых не изменяются на протяжении длительного времени.
  • При излечении через 1,5-2 месяца IgA и IgM в крови не обнаруживаются, а IgG могут сохраняться в течение нескольких лет, однако их уровень снижается в 4-6 раз.
  • Длительно обнаруживаемые IgG указывают на перенесённую хламидийную инфекцию.
  • При обострении хламидиоза количество IgA и IgG увеличивается в несколько раз.
  • Эффективность проведенного лечения определяется по наличию IgA. Если через 2 месяца после курса лечения в крови обнаруживаются IgA — это означает, что инфекция осталась.

Необходимо отметить, что специфические антитела, вырабатываемые к хламидиям, не обеспечивают стойкого иммунитета против них.
Точность этого анализа на хламидиоз составляет около 70 %. Это связано с тем, что антитела к хламидиям могут присутствовать и у здоровых людей вследствие ранее перенесенного заболевания, а также определяться при респираторных и других видах хламидийных инфекций.

4. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).
С помощью ПЦР выявляется специфический участок или фрагмент ДНК хламидий в исследуемом материале, поэтому в сравнении с другими методами спутать хламидии с какой-то другой инфекцией невозможно. Он эффективен как в острой, так и в хронической фазе заболевания. При этом для анализа нужно совсем немного материала, результаты же готовы уже через 1-2 дня.
Для ПЦР исследования материалом может быть соскоб из уретры или цервикального канала, секрет предстательной железы, осадок мочи, соскоб с конъюнктивы глаз, кровь.
При диагностике первичного заражения более информативным является выявление данной инфекции в местах изначальной локализации, т.е
. материалом должны быть соскобы из половых путей. Ложноположительные результаты ПЦР могут быть в случае нарушения процесса забора, транспортировки материала и проведения самого анализа.

Важно! Для оценки эффективности лечения ПЦР исследование нельзя проводить ранее чем через месяц после курса антибиотикотерапии, т.к. можно получить ложноположительные результаты. Это связано с тем, что при выявлении фрагмента ДНК хламидии невозможно оценить, насколько жизнеспособна сама микробная клетка. В этом случае жизнеспособность хламидий, а также связанная с ней возможность рецидивов болезни оценивается с помощью микробиологического метода. Если хламидия нежизнеспособна, то, несмотря на наличие фрагмента ДНК, микробные клетки не будут расти в клеточной культуре.
На сегодняшний день точность этого методы является самой высокой — до 100 %.
Данный метод рекомендован как предпочтительный в диагностике хламидийной инфекции.

5. Микробиологическое исследование (культуральный метод) с определением чувствительности к антибиотикам.
Суть этого метода состоит в том, что исследуемый материал высевается на специальную среду и выращивается. Затем по характеру роста и другим признакам идентифицируется возбудитель. Культуральный метод является наиболее чувствительным, он позволяет не только выявить жизнеспособные хламидии, но и подобрать антибиотик, к которому чувствителен данный микроорганизм.
Материалом для исследований может служить соскоб из уретры, шейки матки, секрет простаты, соскоб с конъюнктивы глаза.
За месяц до исследования нельзя применять антибиотики.
Микробиологическое исследование предпочтительнее проводить в следующих случаях:

  • Для оценки эффективности проведенного антибактериального лечения.
  • Для выявления чувствительности к антибактериальным препаратам.
  • Для выявления хламидий у лиц с иммунодефицитами (ВИЧ инфицированные, онкологические больные после лучевой и химиотерапии, лица, получающие иммунодепрессанты, др.).

Недостатками культурального метода диагностики хламидиоза являются трудоемкость, дороговизна и длительность исследования. Также необходимо особое оснащение лаборатории и очень высокая квалификация персонала. Кроме того, данный метод, как никакой другой, требует безукоризненного соблюдения правил при заборе материала, транспортировке и хранении.
Реальный срок получения результатов этим методом – не менее семи дней.
Выявляемость хламидий при посеве составляет до 90 %.

6. Экспресс-диагностика.
В основе всех методов экспресс-диагностики хламидиоза лежит ферментспецифическая реакция и иммунохроматография. Для этого используются специальные наборы для экспресс-диагностики, которые позволяют визуально оценивать результаты уже через 10-15 минут. Это очень быстрый и удобный метод, но его точность составляет всего 20-25 %.

Выводы.

  • Не существует ни одного метода, который бы в 100% случаев выявлял хламидии. Поэтому в большей части случаев лабораторная диагностика должна включать в себя сочетание не менее двух методов.
  • Самые чувствительные анализы на хламидиоз — ПЦР (ДНК — диагностика) и микробиологический анализ. Они являются «юридическим стандартом» при диагностике хламидиоза.
  • В случае первичного заражения до применения антибиотиков чаще всего достаточно одного ПЦР исследования.
  • При хронических процессах — ПЦР или микробиологический тест, или РИФ+ИФА.
  • При вероятности перехода возбудителя в L-форму – ИФА.
  • Для оценки эффективности лечения в идеале используется микробиологическое исследование. При невозможности его проведения – ПЦР + ИФА.
  • Для определения стадии болезни – ИФА.
  • У больных с иммунодефицитами ИФА не информативен, в идеале использовать микробиологический метод.
  • Не стоит особо полагаться на результаты по определению чувствительности хламидий к антибиотикам. Ведь, как известно, микроорганизмы ведут себя по-разному в пробирке (in vitro) и в живом организме(in vivo).
Источник: medinteres.ru

Хламидиоз часто протекает скрыто, без явной клинической симптоматики. Вот почему так важна своевременная и точная диагностика хламидиоза. Какие методы обследования справятся с этой задачей лучше всего?

Методы диагностики хламидиоза

Методы диагностики хламидиоза у мужчин и женщин делятся на 2 направления:

  1. Для непосредственного выявления хламидий.
  2. Для обнаружения тех изменений, которые они вызывают.

В первом случае применяются 4 основных метода:

  1. Культуральный способ – обнаружение хламидий в клеточной культуре (используется посев биологического материала на специальные среды). Этот метод считается «золотым стандартом», однако выполнить его не всегда просто. Он требует больших материальных затрат и длительного времени ожидания результатов.
  2. Выявление ДНК хламидий – ПЦР (метод полимеразной цепной реакции);
  3. Серологические методы, которые предполагают выявление антител к хламидиям. Это иммуноглобулины, которые могут быть разных классов M, G, A.
  4. Выявление антигенов хламидиоза с помощью меченых антител.

Во втором случае, т.е. для диагностики тех изменений, которые вызывают хламидии, используются следующие методы:

  1. Кольпоскопическое обследование шейки матки у женщин. Оно предполагает осмотр цервикального канала и шеечной поверхности под увеличением кольпоскопа.
  2. Уретроскопия – эндоскопическая визуализация слизистой мочеиспускательного канала, который достаточно часто поражается на фоне хламидиоза.
  3. Рентгенологическое обследование легких, вовлекаемых в патологический процесс, если заражение произошло пневмофильными возбудителями хламидиоза. В этом случае также может применяться и бронхоскопия – эндоскопическое обследование бронхиального дерева.

Лабораторная диагностика хламидиоза

Лабораторная диагностика хламидиоза у мужчин и женщин проявляет различную чувствительность и специфичность. Поэтому надо не растеряться и понять, какой метод обследования выбрать для себя. Как же сделать правильный выбор? Разбираемся в вопросе поэтапно.

Для начала следует определиться с такими понятиями, как специфичность и чувствительность метода.

  • Специфичность — это доля тех людей, у которых результаты диагностики отрицательны, по отношению ко всем небольным пациентам. Этот критерий отражает, насколько метод оказывается ценным в отношении здоровых людей. Чем выше специфичность, тем больше вероятность того, что здоровый человек не будет принят за больного.
  • Чувствительность — это доля тех людей, у которых результаты диагностики положительны по отношению ко всем больным пациентам. Этот показатель отражает процент выявления случаев заболевания. Чем он выше, тем больше шансов, что будет выявлен действительно больной человек.

Культуральная диагностика хламидиоза

Лучшими являются культуральные методы, потому что их чувствительность составляет 70-80% в сравнении с ПЦР. Это означает, что такая диагностика выявляет 70-80% больных хламидиозом пациентов, а только в 20-30% случаев они ускользают из поля зрения клинициста, т.к. тест оказывается отрицательным. Несмотря на высокую эффективность такой диагностики, она является очень трудоемкой, т.к. необходимо произвести забор материала в стерильных условиях, поместить его на специальные среды и дождаться роста колоний, при этом обеспечив достаточные для этого процесса условия.

Чаще всего такая диагностика хламидиоза у мужчин и женщин используется в 3 случаях:

  • Научно-экспериментальные цели для получения данных, необходимых в клинической практике (инновационная диагностика хламидиоза и лечение, а также выявление особенностей клинической симптоматики в зависимости от вида возбудителя).
  • Определение информативности других методов диагностики.
  • Оценка чувствительности хламидий к антибиотикам, особенно при упорном и длительном течении хламидиоза.

Выявление антител к хламидиям

Такая диагностика хламидиоза включает в себя следующие методы:

  • иммуноферментный анализ;
  • реакция иммуноблотинга;
  • реакция геммаглютинации.

Однако наибольшее распространение для обнаружения хламидиоза у мужчин и женщин получил первый метод – иммуноферментное исследование. Он давно применяется в клинической практике и имеет массу положительных отзывов от врачей. Этот метод предполагает выявление в крови или соскобе противохламидийных антител – иммуноглобулинов различных классов.

Важно учитывать, что хламидии не являются мощным антигенным стимулятором иммунной системы, поэтому образование антител происходит не очень активно и в малых количествах. В связи с этим, чтобы диагностика хламидиоза у мужчин и женщин была особенно информативна, рекомендуется производить забор крови в определенные временные промежутки. Оптимальнее это делать в период яркой клинической симптоматики, особенно связанно с системными проявлениями (поражение глаз, суставов, сердца и т.д.).

У пациентов возникает вопрос, как провести диагностику хламидиоза, если поблизости нет современной лаборатории. Методы иммуноферментного анализа как нельзя лучше решают эту задачу, т.к. материал можно определенное время хранить в специальных условиях. Для этого сыворотку необходимо пропустить через центрифугу, чтобы плазма отделилась от форменных элементов. В таком виде при температуре 4-8 °С можно сохранять в течение 5 дней, а в температурном режиме — 20°С она сохраняется до 1 месяца.

Чтобы результаты обследования были наиболее достоверными, врачи советуют проводить исследование в динамике через некоторое время, например, после лечения. Это поможет выявить, как изменяется титр антител – снижается, остается на прежнем уровне или повышается. После терапии оптимальным вариантом является его снижение. Если же имеется возрастание титра в 4 раза и более, то это обычно указывает на обострение патологического процесса.

Однако метод иммуноферментного анализа может выполняться не только с кровью. В качестве материала некоторые фирмы производители тест-систем предполагают использование отделяемого или соскобов со слизистой оболочки мочеполового тракта (наружные отделы) или прямой кишки, или глаз.

Этим способом выявить наличие противохламидийных антител удается в 60-70% случаев.

ПЦР-диагностика

Методы ПЦР для выявления хламидиоза у мужчин и женщин в настоящее время очень широко используются. Этот способ предполагает создание многочисленных копий нуклеиновых кислот хламидий (ДНК или РНК) и выявление их с помощью стандартных методов (чаще всего используется все тот же иммуноферментный анализ).

Главное преимущество ПЦР в выявлении хламидиоза — это высокая чувствительность и специфичность такой диагностики, которая практически сопоставима с культуральным методом, но при этом не требует таких колоссальных затрат. Однако у метода есть и свои недостатки, которые в большей степени касаются материальной стороны. Так, ПЦР требует:

  • дорогостоящего оборудования;
  • специально укомплектованной лаборатории;
  • должной подготовки медицинского персонала для выполнения анализов.

Еще один минус ПЦР — это обсеменение материала сопутствующей микрофлорой (кроме хламидий), что негативно сказывается на результатах обследования. Поэтому ПЦР не лишена ложноположительных результатов.

Выявление хламидийных антигенов

Этот метод основан на иммунофлюоресцентной микроскопии взятых мазков. Под воздействием люминесцентного свечения хламидии выглядят как желтые и желто-зеленые тельца на фоне цитоплазмы, которая в этом свечении визуализируется как желто-коричневая. Этот метод позволяет также выявлять даже растворимые хламидийные антигены, поэтому используется как скрининговый, т.е. предназначенный для массового обследования.

Большинство зарубежных фирм выпускает специальные экспресс-тесты для диагностики хламидиоза. Они содержат моноклональные антитела, которые связываются с антигенами хламидий и обеспечивают специфическое свечение.

Однако для того, чтобы диагностика хламидиоза была проведена данным методом, требуется наличие люминесцентного микроскопа и обученного лаборанта. Это не единственные недостатки, которые присущи этому методу. Он имеет хороший уровень чувствительности и специфичности, однако этих показателей недостаточно для стабильного выявления малых количеств элементарных телец, располагающихся вне клеток организма человека. К тому же методы иммунофлюоресцентной микроскопии не могут использоваться для проверки отрицательных результатов обследования, полученных иным способом. Всё это заметно снижает диагностическую ценность иммунофлюоресценции.

Забор материала

Лабораторная диагностика хламидиоза у мужчин и женщин предполагает в обязательном порядке правильный забор материала. В противном случае велика доля ложноотрицательных результатов. Но что значит правильный забор?

Опорными пунктами «правильности» являются:

  • До взятия биологического материала у мужчин и женщин им запрещено мочиться за 1-1,5 часа до процедуры. Это позволит не смыть хламидии со слизистой, а значит, они попадут в получаемый образец материала. Однако если имеются обильные гнойные выделения, то материал берут сразу же после мочеиспускания.
  • Для взятия соскоба использует специальные инструменты. Это могут быть ложки Фолькмана, стерильные тампоны, платиновая петля (чаще всего применяется у мужчин) или щеточка.
  • Перед забором материала врач обязательно удаляет слизистую пробку, в которой патогенных возбудителей обычно очень мало, чтобы их идентифицировать (определить).
  • Важно производить забор материала при подозрении на урогенитальную форму хламидиоза из наиболее уязвимых зон. Это одна у мужчин – уретра – и 2 зоны у женщин – слизистая шейки матки и мочеиспускательный канал.
  • Помимо знания мест забора, надо еще и соблюсти требуемую глубину введения инструментов, чтобы получить материал, где больше всего будет хламидий в случае имеющегося инфицирования. У женщин — это 1,5 см для цервикального канала и 1-1,5 см для уретры. У мужчин – 2,5-4 см вглубь уретрального канала, при этом требуется предварительная обработка с помощью физиологического раствора головки пениса в месте введения инструментов.

Инструментальная диагностика хламидиоза у женщин и мужчин

Как же определить, насколько проявилось негативное влияние хламидий на организм человека? В этом помогут инструментальные методы диагностики. С их помощью можно определить, какой орган поражен, есть ли осложнения и т.д.

У мужчин для оценки степени прогрессирования урогенитального хламидиоза чаще всего врачами применяется:

  • УЗ-сканирование органов малого таза – простаты, семенных пузырьков, яичка и т.д.
  • Уретроскопия – осмотр слизистой мочеиспускательного канала с применением эндоскопической техники.
  • Экскреторная урография – для исключения поражения почек (хламидийного пиелонефрита).

Женщинам показаны следующие методы обследования, определяющие урогенитальную форму хламидийной инфекции:

  • Кольпоскопия.
  • УЗ-сканирование матки и ее придатков для выявления хронического воспалительного процесса.
  • Рентгенография почек.

Для исключения хламидийной пневмонии, бронхита или фарингита проводится рентгенологическое обследование. Осмотр глазного яблока с помощью микроскопа позволяет выявить конъюнктивит и предположить его природу.

При подозрении на синдром Рейтера проводится рентгенологическое обследование суставов. Оно оценивает состояние хряща и околосуставных тканей, которые часто вовлекаются в патологический процесс при хламидиозе.

Заключение

Современная диагностика хламидиоза у мужчин и женщин предполагает в первую очередь проведение лабораторных исследований, среди которых особенно информативными являются ПЦР и серологические методы. Параллельно проводятся и инструментальные методы, направленные на выявление тех патологических изменений в организме, которые вызвали хламидии.

Источник: minoleksin.ru

От точности и скорости диагностики напрямую зависит, как быстро можно будет начать лечение хламидиоза. Это заболевание не дает специфичных симптомов, поэтому лабораторные методы диагностики выходят на первый план для определения возбудителя.

Метод полимеразной цепной реакции — один из самых современных методов диагностирования. Врачи оценили его точность и скорость получения результатов, поэтому часто назначают этот тип анализа в ходе детального обследования и выявления хламидиоза.

Что представляет собой анализ

Данный тип исследования используют для всех возрастных категорий, его можно назначать даже новорожденным детям, не говоря о взрослых мужчинах и женщинах.

Объектом исследования при анализе является хламидия трахоматис — патогенный микроорганизм, присутствие которого в организме вызывает развитие хламидиоза.

По международной системе классификации заболеваний МКБ-10, которую используют медики всего мира, хламидийной инфекции присвоен код А74.

Болезнь может давать различные симптомы, а может протекать абсолютно бессимптомно, но ПЦР-исследование способно выявить бактерию даже в этом случае, чем не могут похвастаться остальные инструментально-клинические методы.

Суть анализа заключается в том, чтобы точно скопировать и быстро размножить фрагменты цепочки ДНК того микроорганизма, который стал причиной заболевания. Чтобы ускорить этот процесс, в лаборатории применяют специальные ферменты, способные активизировать постройку новых генетических цепочек.

Результатом таких воспроизведений становится увеличение генетического материала в пробе, доходящее до миллиона раз, что значительно облегчает его выявление. После того, как ДНК микроорганизма обнаружено, его тщательно исследуют под микроскопом и безошибочно определяют. Определение выполняет лаборант, сравнивая полученный образец с эталонными, имеющимися в лаборатории, которые заказывают в исследовательских институтах.

Нередко ПЦР используется при поиске причин бесплодия или неспособности к вынашиванию плода или осложнениях в ходе беременности. Также человек может пожелать провести диагностику после незащищенного полового акта с партнером, в здоровье которого не уверен.

Плюсы и минусы метода ПЦР

Среди неоспоримых преимуществ анализа выделяются такие:

  • высокая чувствительность методики (не менее 95%);
  • возможность применения в инкубационном, латентном или хроническом периоде хламидиоза, а также при носительстве;
  • перечень материала для исследования строго не определяется, поэтому при невозможности использовать, к примеру, кровь можно легко заменить ее мокротой или слизью с половых органов;
  • скорость получения данных после анализа (в среднем протокол выдают на руки на следующий день, но при острой необходимости возможно получить его и в день взятия пробы);
  • анализ является прямым и позволяет выявить саму бактерию хламидии трахоматис, а не косвенные показатели ее присутствия — антитела.

Немаловажным фактором является то что полимеразная цепная реакция во время обследования позволяет одновременно выявлять некоторые сопутствующие заболевания, имеющие общую симптоматику с хламидиозом. Такими инфекциями являются практически все урогенитальные инфекции, многие вирусные и бактериальные болезни (уреаплазмоз, кандидоз, микоплазмоз, цитомегалия и пр.).

К недостаткам относятся:

  • высокие требования по санитарным нормам к лаборатории паолимеразной цепной реакции, которые необходимо соблюдать, чтобы не получить ложноположительных результатов из-за загрязнения пробы;
  • незначительная вероятность ложноотрицательного результата (для того, чтобы избежать этого явления необходимо тестирование сразу нескольких видов биоматериала);
  • сложность интерпретации результатов, которые должен оценивать квалифицированный специалист, учитывая динамику хламидиоза и обладая достаточными знаниями в сфере иммунологии и инфекционных болезней;
  • высокая стоимость исследования, что объясняется особыми требованиями к оснащению лаборатории и квалификацией персонала.

Несмотря на наличие недостатков, в настоящее время ПЦР признан самым удачным в плане диагностики хламидиоза.

Какой материал необходимо сдать для анализа

Для того, чтобы успешно провести тестирование образца при помощи полимеразной цепной реакции на хламидии, достаточно небольшого объема материала, что является еще одним преимуществом. Для диагностики подходит большинство биологических жидкостей, кровь и образцы мягких тканей.

У мужчин для определения хламидий берут:

  • мазок из уретры;
  • мазок из конъюнктивы;
  • сперму;
  • мочу;
  • жидкость из предстательной железы;
  • синовиальную жидкость.

Материалом, который берут для исследования у женщин, является:

  • соскоб из уретры;
  • эпителий из цервикального канала;
  • моча;
  • мазок из конъюнктивы;
  • синовиальная жидкость.

Кровь берется из локтевой вены на руке, достаточно 10-15 мл. В современных лабораториях для этого используют специальные вакуумные системы, которые предотвращают попадание посторонних микробов в образец, увеличивая тем самым точность результатов.

Если необходим образец синовиальной жидкости, то делают пункцию суставного аппарата специальной толстой иглой с диаметром 0,8 мм. Введение этой иглы проходит болезненно, поэтому иногда перед введением применяют местное обезболивание.

Биоматериал могут отобрать в лаборатории, а могут делать отбор проб непосредственно в поликлинике или больнице, после чего направлять его на тестирование в ПЦР лабораторию. Некоторые частные диагностические центры за дополнительную плату берут образцы для исследования на дому у пациента.

Для оценки заражения околоплодных вод хламидиями во время беременности отбирают небольшое количество амниотической жидкости. Делают это только при острой необходимости, так как методика несет небольшую опасность для протекания беременности. Для этого производят прокол брюшной полости и под контролем УЗИ отбирают необходимое количество околоплодных вод.

Для всех беременных при постановке на учет в женскую консультацию назначают обследование на наличие хламидий в крови, для чего проводят ПЦР-тестирование, поскольку хламидиоз является тяжелой TORCH-инфекцией, способной нарушить ход беременности и осложнить развитие плода. Для такого типа обследования всегда используют кровь из вены.

Подготовка к анализу ПЦР

Правильная подготовка к обследованию на хламидии — одно из основных требований для получения корректных и точных результатов.

Для каждого типа биоматериала предусматривается специфичная подготовка. О всех требованиях, необходимых в процессе подготовки к ПЦР тестированию, пациенту должен подробно рассказать специалист, который выдает направление.

Перед сдачей мазков или мочи женщинам запрещено:

  • на протяжении 3 суток пользоваться внутривагинальными свечами;
  • применять вагинальные спринцевания, орошения или тампоны, пропитанные любыми настоями или отварами трав.

Сдавать мазок для ПЦР анализа на хламидиоз во время месячных нельзя.

Перед сдачей мазков или мочи как мужчинам, так и женщинам запрещается:

  • ходить в туалет меньше, чем за 3 часа до отбора;
  • выполнять гигиенические процедуры с применением дезинфицирующих или антибактериальных средств;
  • заниматься сексом на протяжении 3-х предшествующих суток.

Для девочек возрастом до 14 лет мазок могут брать не из влагалища, а из слизистой оболочки преддверия влагалища, чтобы не повредить девственную плеву.

Перед сдачей крови для ПЦР на хламидии нужно не употреблять спиртные напитки, несколько дней не есть жирную пищу и жареные блюда, а также не курить за несколько часов до манипуляции.

Сдавая мочу, необходимо помнить, что показательнее всего — первая утренняя порция, первые и последние капли отбрасываются. Контейнер обязательно должен быть стерильным. Для исследования нужно предоставить около 50 миллилитров мочи.

Перед отбором материала любого типа для определения хламидий нельзя принимать антибиотики или уросептики. Это возможно только в том случае, если исследование проводится для определения эффективности лечения, в остальных случаях применять такие препараты на протяжении двух недель перед ПЦР-диагностикой запрещено.

Расшифровка результатов

Исследование на наличие хламидий при помощи полимеразной цепной реакции является качественным методом, то есть он показывает не количество бактерий в пробе, а их присутствие или отсутствие.

В протоколе ПЦР анализа указывается фамилия пациента, дата исследования, название бактерии (Chlamydia trachomatis) и полученный результат: положительный («обнаружено») или отрицательный («не обнаружено»). Иногда их описывают при помощи значков «+» или «-».

Если получен положительный результат, то это означает, что в организме присутствует острый процесс, или пациент является носителем заболевания.

В норме отрицательный результат означает, что в пробе не обнаружены такие бактерии, то есть, он здоров.

Если у взрослого человека обнаружена бактерия хламидия трахоматис, это означает, что половому партнеру обязательно нужно обследоваться даже в том случае, если клинических проявлений хламидиоза у него нет. Отсутствие симптомов не гарантирует отсутствие болезни, у него может быть бессимптомная форма, которая не исключает осложнений и возможности заразить других людей.

В завершение следует отметить, что ПЦР является одним из основных средств выявления хламидиоза в настоящее время, тогда как другие методы преимущественно используют в качестве дополнительных методов.

Об особенностях диагностики хламидиоза методом ПЦР на данном видео рассказывает врач-венеролог.

Источник: myvenerolog.com

Среди инфекций, заражение которыми происходит преимущественно половым путем, одна из ведущих ролей принадлежит хламидиям. Эти внутриклеточные паразиты. Они легко проникают в организм человека при незащищенном сексуальном контакте, поражая мочеполовой тракт.

Опасны не только местными симптомами, но и системной реакцией иммунной системы. Поэтому даже при отсутствии клинической симптоматики, важно своевременно выявлять опасный микроорганизм. Наиболее подходящим способом является анализ ПЦР на хламидии.

К чему приводит заражение

Хламидия трахоматис – это паразиты, располагающиеся внутриклеточно в эпителии мочеполового тракта. Такое паразитирование приводит к затяжному инфицированию, так как клиническими симптомами заболевание не проявляется.

В организме появляются антитела к хламидиям. Это приводит к поражению не только урогенитального тракта, но и суставов, сердца и внутренних органов. Заражение происходит мгновенно при незащищенном половом контакте, если один из партнеров инфицирован. Далее паразиты проникают в эпителий и интенсивно размножаются.

Возникает острая инфекция, которая зачастую сопровождается мучительными симптомами:

  • жжением при мочеиспускании
  • болями внизу живота
  • снижением либидо
  • неприятными выделениями из половых путей
  • дискомфортом при сексуальном контакте
  • общей интоксикацией (редко)

Но поражается не только мочеполовой тракт. Часто возникают проблемы с органом зрения и суставами.

При долгом персистировании хламидий возможно развитие контрактур крупных сочленений, что приводит к резкому снижению качества жизни. Кроме того, хламидии часто являются спутниками бесплодия и импотенции. Поэтому выявление микроорганизмов – важная цель для сохранения здоровья на долгие годы.

Кому показано обследование

Абсолютно всем людям, которые хотя бы однократно совершали сексуальные контакты без средств индивидуальной защиты. Следует провести исследование методом полимеразно-цепной реакции. Кроме того, обследование желательно проводить у большого контингента граждан.

Наиболее целесообразна ПЦР на хламидии в следующих ситуациях:

  • любые симптомы неблагополучия в мочеполовой сфере
  • субфебрилитет без четкой причины
  • снижение трудоспособности
  • частая смена половых партнеров
  • бесплодие
  • простатит
  • снижение ощущений от сексуальной близости
  • низкое либидо или эректильная дисфункция
  • беременность

В последнем случае ПЦР нужно проводить обязательно. Так как микроорганизмы могут вызвать нарушения во время вынашивания ребенка.

Лучше выполнить исследование до зачатия, и в случае положительного результата, провести лечение. Однако даже при беременности адекватная терапия поможет избежать выкидыша.

Анализ ПЦР на хламидии: что можно исследовать

Так как хламидиоз поражает множество различных органов и систем, то материал для диагностики берут из разных мест.

Ниже рассмотрены основные варианты взятия биоматериала:

  • Мазок со слизистой урогенитального тракта. Наиболее распространенный метод диагностики. Для исследования подходит отделяемое влагалища, слизистая уретры или соскоб с наружных половых органов
  • Мазок из горла. Инфекция может попадать и распространяться через дыхательные пути. Поэтому при наличии гиперемии полости рта и часто возникающих простудных заболеваний используется мазок с задней поверхности глотки и миндалин
  • Мазок с конъюнктивы. Метод исследования возможен только в том случае, если есть клинические проявления поражения органа зрения. В остальных ситуациях в практической работе не используется
  • Исследование спермы. Хламидии часто поражают мужскую репродуктивную систему. Поэтому анализа эякулята применяется часто

  • Анализ мочи. Так как хламидии паразитируют в слизистой уретры, то зачастую дополнительно требуется поиск ДНК хламидий в моче. Исследование высокоинформативно и служит основой для назначения специфического лечения. Важно лишь помнить, как собирается мочаправильно. Только первая порция подходит для ПЦР, так как затем хламидии смываются
  • Анализ синовиальной жидкости. В нем возникает необходимость при наличии экссудативного воспаления в полости сустава, вызванного хламидиями. Пункция сочленения выполняется только в асептических условиях, чаще врачом-хирургом или травматологом

Выбор способа исследования материала зависит от клинической симптоматики. При отсутствии симптомов при подозрении на скрытую половую хламидийную инфекцию предпочтение отдается анализу мазка из урогенитального тракта.

Правила подготовки к процедуре

Чтобы получить наиболее достоверный результат, пациент должен ответственно подойти к подготовке к исследованию.

Для взятия мазка у женщин существуют следующие правила:

  • последнее мочеиспускание за 3 часа до взятия материала
  • идеальный период – с 5 дня месячных
  • при наличии обильного кровянистого отделяемого исследование лучше отложить
  • гигиенические мероприятия не менее чем за 2 часа до взятия мазка
  • спринцевания запрещены
  • за 48 часов желательно воздержаться от употребления алкоголя, если не сказано врачом иное

Как сдавать мужчинам анализ?

Для мужчин правила отличаются в связи с физиологическими особенностями строения половых органов.

Последнее мочеиспускание не менее, чем за 2 часа до исследования. Алкоголь нежелательно употреблять за 72 часа до процедуры. После любых инструментальных обследований, например цистоскопии, должно пройти не менее 5 дней.

Мазок из горла берется обычно утром натощак, принимать пищу и пить воду нежелательно, так как хламидии могут быть смыты. Анализ синовиальной жидкости не требует специальной подготовки. Так как материал получают непосредственно в кабинете врача.

Кровь обычно для ПЦР не используется. составляют случаи, когда подозревается генерализация и распространение микроорганизмов с током крови или лимфы.

Гемотест подтверждает лишь наличие антител, а ПЦР подразумевает определение самой ДНК хламидии. Для выявления антител применяется метод ИФА, но он менее информативен.

ПЦР мазок на хламидии

Универсальным способ получения материала является мазок. Его делают нативно, то есть непосредственно в кабинете врача и сразу отправляют в лабораторию. Это обеспечивает высокую точность диагностики и минимум ошибочных результатов.

Исследование методом ПЦР позволяет обнаружить ДНК хламидии. Это означает 100%-ную специфичность анализа, так как ДНК является уникальной и принадлежит конкретному возбудителю.

Проблемы в урогенитальном тракте могут вызывать не только хламидии. Часто появляется герпес, уреаплазма или микоплазма. Они могут сопутствовать хламидиям и утяжелять течение болезни, но иногда персистируют изолированно. Поэтому параллельно можно исследовать мазок методом ПЦР не только на хламидийную инфекцию, но и на многие другие микроорганизмы.

Однако обследование выполняется обычно с материалом из половых органов, кровь для мазка, как правило, не пригодна. О том, как сдавать мазок, лучше посоветоваться с лечащим специалистом.

Многих людей волнует вопрос, могут ли не определяться в мазке хламидии? Метод ПЦР выявляет конкретную ДНК. Поэтому при наличии этих возбудителей в организме человека, результат будет положительным.

Хламидии не обнаружат в том случае, если неверно проведена подготовка. Либо с момента заражения прошло недостаточно времени для их размножения.

Этапы выполнения анализа

От того, сколько дней делается анализ, немало зависит от последовательности и быстроты проведения забора материала и доставки его в лабораторию. Даже временной фактор будет иметь значение, так как субстрат, полученный утром, будет проанализирован в этот же день.

Полная последовательность этапов анализа ПЦР на хламидии следующая:

  • осмотр специалиста
  • взятие биоматериала
  • упаковка в физиологическую для хламидий среду
  • доставка в лабораторию
  • проведение теста
  • врачебная верификация
  • выдача результата

Непосредственная продолжительность тестирования не превышает 4 часов. Однако из-за задержек при транспортировке или позднем взятии материала, анализ бывает готов только на следующий день.

Обязательным условием достоверности исследования является врачебная верификация. Это означает, что врач-лаборант лично осматривает тест и проверяет наличие хламидийной ДНК.

Существует два варианта проведения полимеразно-цепной реакции – количественный и качественный.

Во втором случае результат будет получен быстрее, так как не требуется подсчет геномных эквивалентов микроорганизма. От этого же зависит, сколько стоит исследование. При получении количественного результата цена будет выше.

Однако в практической медицине ценовой диапазон на ПЦР не слишком высок. Так как проводить обследование требуется многим людям.

Интерпретация результата

Расшифровка анализа не представляет трудностей.

Качественный вариант исследования подразумевает только подтверждение наличия микроорганизма. Поэтому в заключении будет написано, отрицательный или положительный результат обнаружения ДНК.

Количественный вариант требует подсчет геномных эквивалентов (ГЭ). Чем их больше, тем серьезнее поражение человека.

Общепринятой градацией является следующая:

  • менее 10 в 4 степениГЭ/мкл – низкая распространенность хламидий
  • от 10*4 до 10*5 ГЭ/мкл – средняя степень
  • более 10*5 ГЭ/мкл – очень высокий уровень заражения

Зависимость прямая. Чем больше хламидий, тем тяжелее протекает заболевание и вероятнее развитие системных негативных реакций.

Положительный результат свидетельствует о наличии инфекции.
 Это значит, что необходимо проводить антимикробную терапию.

Отрицательный ответ свидетельствует лишь о том, что в настоящий момент возбудители не обнаружены. Однако при наличии факторов риска, обследование желательно повторить через 1 месяц.

Ложноположительных реакций не бывает, так как ДНК уникальна и типична только для одного конкретного возбудителя. Для получения достоверной картины инфицирования анализ лучше сдавать обоим партнером. В этом случае, даже при выявлении у одного из них, лечебные мероприятия потребуются каждому. Таким образом, анализ ПЦР на хламидии является незаменимым для точной диагностики половых инфекций.

Проводить обследование лучше в клинике, где имеются профильные специалисты. В кожно-венерологическом диспансере непосредственно занимаются проблемами пациентов с хламидийной инфекцией. Это означает, что в наличии имеются «свежие» реактивы и надежная современная лаборатория. Поэтому в КВД результаты выдаются в течение суток после взятия материала. Это позволяет в кратчайшие сроки начать лечение, которое предложат опытные врачи-венерологи, работающие в клинике.

Выявление и излечение хламидий – важнейший этап оздоровления организма.

Источник: onvenerolog.ru