Применение иммуноферментного анализа (ИФА) при диагностике аллергических заболеваний у собак и кошек


ИФА — это современное лабораторное исследование, в ходе которого ведется поиск специфических антител в крови (либо антигенов) к конкретным заболеваниям с целью выявления не только этиологии, но и стадии болезни.

В рутинной ветеринарной практике ИФА рекомендован в следующих случаях:

  1. поиск специфических антител к любому инфекционному заболеванию;
  2. поиск антигенов каких-либо инфекционных заболеваний;
  3. исследование гормонального статуса пациента;
  4. обследование на предмет наличия аутоиммунных заболеваний.

Как и у любого метода лабораторной диагностики ИФА имеет свои преимущества и свои недостатки. К преимуществам метода относятся:

  1. высокая специфичность и чувствительность метода (более 90%);
  2. возможность определения заболевания и отслеживания динамики процесса, то есть сравнение количества антител в разных временных промежутках;
  3. доступность и скорость данного исследования;
  4. не инвазивный способ забора материала не исследование;

Недостатком метода является тот факт, что в ходе анализа удается выявить не самого возбудителя заболевания, а только иммунный ответ на него (антитела).

Суть метода ИФА

Выделяют несколько разновидностей ИФА: прямой, непрямой, метод блокирования, конкурентный. Однако на практике чаще всего используется гетерогенный твердофазный иммунный анализ или ELISA.

Основу иммуноферментного анализа составляет иммунная реакция антигена и антитела с образованием иммунного комплекса, в результате чего происходит изменение ферментативной активности специфических меток на поверхности антител.

По сути, этот процесс можно разделить на несколько этапов:

  1. на поверхности лунок планшета тест-системы находится очищенный антиген определенного возбудителя. При добавлении сыворотки крови животного происходит специфическая реакция между этим антигеном и искомым антителом;
  2. далее, в лунку добавляется особый хромоген (конъюгат, меченный пероксидазой). Происходит ферментативная реакция, результатом которой является образование окрашенного вещества в лунке планшета. Интенсивность окраски его зависит от количества содержащихся в сыворотке животного иммуноглобулинов (антител);
  3. далее происходит оценка результата. С помощью многоканального спектрофотометра, происходит сравнение оптической плотности исследуемого материала с оптической плотностью контрольных проб и математическая обработка результатов. Количество антител у пациента напрямую зависит от высоты оптической плотности данной лунки.

Нужно помнить: для каждой тест-системы разрабатываются индивидуальные показатели для учета результатов, показатели нормы и патологии («референтные значения»). Это нужно учитывать при оценке результатов каждого конкретного исследования.

Некорректно интерпретировать результаты одной лаборатории по «референтным значениям» другой лаборатории. Также некорректно сравнивать результаты разных лабораторий между собой.

При оценке результатов на конкретные инфекции имеет значение класс обнаруженных антител и их количество. От этого зависит не только вопрос этиологии инфекции, но и предполагаемая стадия заболевания (острая, хроническая), а также наличие активной инфекции (острой или обострения хронической) на момент обследования.

Каковы приблизительные сроки появления антител?

Самыми ранними антителами являются IgM. Выявить их можно через 1-3 недели после возможного инфицирования, что характеризует острую фазу инфекционного процесса. Вторая ситуация появления антител IgM – обострение хронического процесса.  IgM циркулируют в среднем около 3х месяцев, затем их количество постепенно исчезает. Однако у некоторых пациентов следовые количества IgM могут обнаруживаться в течение 1-2х лет с момента инфицирования.

С 4й недели после инфицирования начинают появляться антитела IgG. При большинстве инфекций титр их постепенно увеличивается с максимумом в разные сроки (в среднем через 1,5-2 мес), далее титр остается на невысоком уровне и указывает на иммунитет. При некоторых заболеваниях уровень IgG не бывает высоким.

Варианты обнаружения антител

  • Изолированное обнаружение антител IgM предполагает наличие первичного инфицирования.
  • Одновременное выявление в крови IgM и IgG характерно для первичного инфицирования в предыдущие 2-3 месяца, а также при обострении хронического заболевания.
  • Выявление изолированно IgG может указывать как на иммунитет к данному заболеванию, так и на хроническую инфекцию. Во второй ситуации имеет значение и количество антител (титр), и изменение этого титра в динамике. Обычно исследования проводят с интервалом в 2-4-6 недель.
Корректное сравнение результатов ИФА, взятых в динамике, возможно только в случае их изготовления в одной и той же лаборатории.
Источник: mitrokhina.ru

Для уточнения вида дирофилярий или диагностики дирофиляриоза при отсутствии микрофиляриемии используются иммунные тесты.

1 метод иммуноферментного анализа при диагностике дирофиляриоза (ELISA).

2 метод непрямой иммунофлюоресценции ИФА

Лечение дирофиляриоза

Приблизительно в 25 % случаев дирофиляриоза наблядается амикрофиляриемическая форма инвазии эффективность тестов, описанных выше в подтверждении диагноза ограничена. Метод непрямой иммунофлюоресценции используется, чтобы обнаружить антитела к микрофиляриям, и имеет специфическую полноценность при диагностике истинного дирофиляриоза и тех случаев, в которых L1 отсутствуют из-за иммунного разрушения. Также разработан метод иммуноферментного анализа при диагностике дирофиляриоза (ELISA), при помощи которого можно обнаружить антитела к дирофиляриям или сам антиген. Тесты,обнаруживающие непосредственно дирофиляриозный антиген антиген,являются более предпочтительными. Метод непрямой иммунофлюоресценции и ИФА разработаны за рубежом, где стали широко использоваться из-за их точности , чувствительности ,специфичности и быстроты исполения. После успешной терапии дирофиляриоза метод IFA (1 год) и ELISA (6 месяцев) дают положительный результат при определении антител.

.

.

Источник: belkavet.ru

[21-780] Смесь бытовых аллергенов dm1 (IgE): Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, эпителий кошки, эпителий собаки, ИФА

1250 руб.

Метод диагностики гиперчувствительности к наиболее распространенным бытовым аллергенам (клещи домашней пыли, эпителий домашних животных), основанный на определении в крови уровня специфичных к ним антител класса IgE, ответственных за развитие аллергических реакций.

* Под аллергологическими исследованиями, содержащими в своем названии словосочетание «смесь аллергенов», подразумевается комплексное скрининговое исследование, которое позволяет выявить сенсибилизацию (повышенную чувствительность организма) к определенной группе аллергенов. При этом результат данного исследования выдается в общем по смеси аллергенов, а не по каждому конкретному аллергену, входящему в эту группу.

Синонимы русские

Смесь аллергенов домашней пыли, аллергены эпидермиса животных.

Синонимы английские

House Dust Mites panel, Epithelia Panel, Dog Dander, Cat Epithelium, IgE.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Развитие многих аллергических заболеваний связано с воздействием аллергенов, находящихся в местах, где человек проводит наибольшее количество времени – в жилых помещениях. В отличие от, например, аллергенов пыльцы трав, которые также являются распространенной причиной аллергии, бытовые аллергены воздействуют на организм круглый год. Гиперсенсибилизация к бытовым аллергенам может приводить к развитию таких аллергических заболеваний, как бронхиальная астма, аллергический ринит, конъюнктивит и атопический дерматит. Наиболее часто встречается гиперсенсибилизация к аллергенам клещей домашней пыли, а также к частичкам кожи и перхоти домашних животных – кошек и собак.

Клещи домашней пыли являются одной из наиболее распространенных причин аллергических заболеваний во всех частях света. Наибольшее значение в этом плане имеют два вида – Dermatophagoides pteronyssinus и Dermatophagoides farinae. Их размер колеблется от 0,1 до 0,3 мм. Основным резервуаром обитания являются предметы мебели и интерьера: ковры, подушки, матрасы, обивка мягкой мебели, а также домашняя пыль. Клещи питаются содержащимися там омертвевшими частичками кожи и перхотью человека. В процессе своей жизнедеятельности они оставляют экскременты, содержащие пищеварительные ферменты, которые и являются основным источником аллергенного воздействия. Экскременты клещей имеют очень маленький размер, поэтому могут легко проникать в организм ингаляционным путем, а также оседать на коже и открытых слизистых, вызывая развитие процессов аллергического воспаления. На основании результатов многих исследований было доказано, что аллергены клещей домашней пыли являются одной из наиболее распространенных причин астмы, ринита и конъюнктивита, усиление симптомов которых происходит, как правило, в ночные или ранние утренние часы (пик продолжительности воздействия аллергена).

Аллергены эпителия и перхоти кошки являются одной из наиболее распространенных причин аллергических заболеваний с респираторными симптомами (бронхиальная астма, аллергический ринит). Резервуарами аллергена в домах, где обитают кошки, являются ковры, мягкая мебель, матрасы, а также одежда человека. К сожалению, только прекращение контактов с животным приводит к улучшению клинической симптоматики вследствие прекращения воздействия аллергенов.

Частички эпителия и перхоть собак содержит большое количество аллергенов. Наибольшая концентрация аллергенов в домах, где обитают собаки, наблюдается на полу в гостиной, на мягкой мебели и в спальне. Частички перхоти имеют очень маленький размер и могут длительной время находиться в воздухе, являясь источником ингаляционных аллергенов. Проявления гиперсенсибилизации включают в себя бронхиальную астму, аллергический ринит и аллергический конъюнктивит.

Механизм развития аллергических реакций связан с выработкой в организме иммуноглобулинов класса Е. После первичного контакта с аллергеном В-лимфоциты продуцируют избыточное количество антител класса IgE, способных связываться исключительно с этим аллергеном. Синтезированные иммуноглобулины фиксируются на поверхности тучных клеток, а при повторном попадании аллергена в организм связываются с ним и стимулируют выброс биологически активных веществ – медиаторов аллергии. В результате этого происходит развитие локального аллергического воспаления. Измерение циркулирующих IgE-антител обеспечивает объективную оценку сенсибилизации к аллергену. На описанном механизме развития аллергии основаны методы лабораторной диагностики аллергических заболеваний путем обнаружения в крови повышенной концентрации иммуноглобулинов Е к определенному аллергену.

Концентрация сывороточных иммуноглобулинов Е в крови человека определяется методом иммуноферментного анализа (ИФА). Принцип ИФА основан на взаимодействии определенного аллергена, фиксированного на поверхности планшета со специфичным к нему IgE, содержащимся в исследуемой сыворотке пациента. При формировании комплекса аллерген-иммуноглобулин специальный фермент, добавленный в реакционную смесь, изменяет её окраску. При этом интенсивность цвета пропорциональна концентрации IgE в исследуемой сыворотке. Интенсивность окраски измеряется специальным прибором, который переводит параметры световой волны в цифры, соответствующие концентрации IgE к определенному аллергену.

Для чего используется исследование?

  • Для подтверждения диагноза аллергического заболевания и установления аллергена, ответственного за его развитие.

Когда назначается исследование?

  • При наличии клинических проявлений аллергического заболевания (прежде всего со стороны респираторной системы), в развитии которого предполагается связь с гиперчувствительностью к аллергенам клещей домашней пыли или эпидермиса домашних животных.

Что означают результаты?

При выявлении повышенного уровня специфических иммуноглобулинов класса Е, пациент считается сенсибилизированным к соответствующим аллергенам.

Что может влиять на результат?

Циркулирующие в крови иммуноглобулины класса Е имеют сравнительно небольшую продолжительность жизни, поэтому в период ремиссии аллергических заболеваний за счет снижения их выработки возрастает вероятность получения отрицательного результата.



Важные замечания

  • Тестирование может проводиться независимо от возраста, тяжести симптомов заболевания и приема антигистаминных препаратов.
  • Исследование может выявить повышение уровня аллерген-специфичных иммуноглобулинов ещё до развития клинических проявлений аллергии.
  • Нежелательно проведение исследования на фоне иммуносупрессивной терапии, которая приводит к угнетению синтеза иммуноглобулинов (цистостатические препараты, длительный прием глюкокортикостероидов, лучевая терапия).
  • Результат исследования должен оцениваться доктором, в комплексе с анамнестическими и клиническими данными и результатами других лабораторных исследований.
  • Иногда белковые компоненты разных аллергенов имеют схожую структуру, при этом аллергические реакции в организме могут возникать как на исходный аллерген, так и на похожий на него. Это называется перекрестной реакцией. Для аллергенов пылевых клещей характерна перекрестная реакция с аллергенами креветок, улиток и тараканов. Данные отдельных исследований свидетельствуют о наличии перекрестной реактивности между аллергенами кошки и собаки.

Также рекомендуется

  • Суммарные иммуноглобулины Е (IgE) в сыворотке
  • Клинический анализ крови с микроскопией лейкоцитарной формулы
  • Аллерген i6 — таракан-прусак, IgE (ImmunoCAP)
  • Аллергокомпонент m218 — Aspergillus fumigatus rAsp f1 (рекомбинантный), IgE (ImmunoCAP)
  • Ринит/астма взрослые
  • Ринит/Астма дети

Кто назначает исследование?

Аллерголог, пульмонолог, терапевт, педиатр, врач общей практики.

Литература

  1. Henry’s Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e  by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Pages 872-878.
  2. A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests, 9th Edition, by Frances Fischbach, Marshall B. Dunning III. Wolters Kluwer Health, 2015. Pages 620-621.
  3. Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство: в 2 т. – T. I / Под ред. В. В. Долгова, В. В. Меньшикова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. С. 135-141.
  4. Аллергология и иммунология: национальное руководство / под ред. Р. М. Хаитова, Н. И. Ильиной. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. С. 396-398.
Источник: helix.ru

Для диагностики инфекционных болезней животных применяются различные методы исследований, в том числе серологические и иммунохимические, основанные на реакции антиген-антитело. Главным компонентом иммунохимической реакции являются антитела (иммуноглобулины) – белки сыворотки крови, которые синтезируются в организме как проявление защитной реакции при попадании чужеродного вещества – антигена. Антитела представляют собой крупные белковые молекулы, состоящие из двух легких (L) и двух тяжелых (H) полипептидных цепей с Мм 22000 и 50000-70000 Да соответственно. Различают 5 классов иммуноглобулинов IgM, IgG, IgA, IgD, IgE, которые отличаются по Мм, размерам Н-цепей, последовательности аминокислот, углеводными компонентами, положению и количеству дисульфидных связей. Все γ-глобулины (антитела) имеют вариабельные участки – активные центры антител. Одна молекула антител может иметь несколько активных центров, способных специфически связываться с антигеном. Активный центр имеет уникальную специфичность, обеспечивающую тесную связь с антигеном, напоминающий соответствие между рукой и перчаткой, или ключом и замком.

В качестве антигенов могут выступать белки, полисахариды, а также низкомолекулярные соединения: антибиотики, пестициды. Антитела образуются не против всей молекулы чужеродного белка, а только к небольшим участкам на их поверхности – антигенным детерминантам. Антигенными детерминантами белковых молекул чаще всего являются лишь около 5 аминокислотных остатков, а в случае бактериальных клеток в качестве антигенных детерминант выступают короткие цепи из 3-5 остатков сахаров, образующих стенки бактериальных клеток. Низкомолекулярные соединения (гаптены) могут образовать антитела лишь после соединения с макромолекулами.

Для получения специфических иммуноглобулинов (антител) применяются различные методы иммунизации мелких (мыши, морские свинки, кролики, куры) и крупных (овцы, козы, лошади) животных. Принципиально новый метод получения антител – это метод гибридом.

Для диагностики инфекционных болезней разработаны высокочувствительные методы – радиоиммунный и иммуноферментный. Радиоиммунный метод требует сложной аппаратуры, радиоактивных соединений, в частности J125, что связано с рядом ограничений, а потому неприемлим в обычных условиях.

Иммуноферментный метод не уступает по чувствительности радиоиммунному, может использоваться в различных лабораторных условиях, а некоторые варианты его могут быть применены непосредственно в условиях животноводческих ферм, например, для определения беременности у коров по уровню содержания прогестерона в молоке. Иммуноферментный метод анализа позволяет определить до 10-14 моля вещества. Принцип метода заключается в том, что при взаимодействии антигена с антителом получается комплекс антиген-антитело. Количество антигена или антитела, вошедшее в комплекс антиген-антитело, может быть определено с помощью фермента, использованного для мечения антигена или антитела в зависимости от поставленной задачи. Сейчас разработаны сотни различных вариантов иммуноферментного анализа на твердом носителе. В этом случае антитела, иммобилизованные на твердой фазе (на иммунологических планшетах из полистирола), реагируют вначале с искомым антигеном (немеченым), а затем остающиеся свободными иммобилизованные антитела связываются с меченным (ферментом) антигеном. Количество связанного с меченным ферментом антигена обнаруживают с помощью соответствующего субстрата. Здесь фермент играет роль маркера, и использование его основано на том, что одна молекула фермента производит много молекул продуктов ферментативной реакции, концентрацию которых можно обнаружить обычными физико-химическими методами или же визуально (по изменению цвета). Иммуноферментный метод используют для выявления иммуноглобулинов, гормонов, вирусных и бактериальных антигенов, лекарственных препаратов, пестицидов и т.д.

Для диагностики инфекционных болезней животных разработаны специальные наборы для диагностики классической чумы свиней, бруцеллеза крупного рогатого скота, бешенства, сибирской язвы, хламидийной инфекции, ротавирусов, инфекционного ринотрахеита и ряда других болезней сельскохозяйственных животных. Использование моноклональных антител делает иммуноферментный анализ еще более ценным, так как при этом в несколько раз повышается его чувствительность и специфичность.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
Источник: studfile.net